多克隆抗體免疫動物:免疫用的動物建議選擇適齡的健康雄性動物,雌性動物特別是妊娠動物用于制備免疫抗體則非常不合適,有時甚至不產(chǎn)生抗體。由于對免疫應(yīng)答的個別差異,免疫時應(yīng)同時選用數(shù)只動物進行免疫。 抗原是多種多樣的,而且千差萬別。就其化學(xué)成分而言,有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言,有完全抗原和不完全抗原。為了獲得較好的抗血清,建議是選用蛋白質(zhì)抗原,如要制備用于篩選細菌表達的 cDNA 文庫或免疫印跡的抗血清,建議選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原,其免疫原性的強弱均不相同,這種免疫原性的強弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等??贵w的半衰期較長,可以在體內(nèi)持續(xù)發(fā)揮作用,保持免疫防御的持久性。廣州IgD抗體補給公司
多克隆抗體免疫動物:免疫劑量與注射途徑有關(guān),一般而言,靜脈注射劑量大于皮下注射,而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大,也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,對家兔而言,采用弗氏完全佐劑,則需注射 0.5mg~1mg/kg./次,如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應(yīng)大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得高效價的抗血清,宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者,可少量多次。免疫周期短者,應(yīng)大量少次。 兩次注射的間隔時間應(yīng)長短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用。一般間隔時間應(yīng)為 5~7 天,加佐劑者應(yīng)為 2 周左右。 注射的 Ig 純度高,則一般不易引起過敏反應(yīng),如注射血清,即使是少量,在再次免疫時,極易引起過敏反應(yīng),所以一定要采取措施。深圳IgG抗體試劑抗體(antibody)是指機體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護作用的蛋白質(zhì)。
抗體基本結(jié)構(gòu):天然Ig分子含有四條異源性多肽鏈,其中,分子量較大的兩條鏈稱為重鏈(heavy chain,H),而分子量較小的兩條鏈稱為輕鏈(Light chain,L)。同一Ig分子中的兩條H鏈和兩條L鏈的氨基酸組成完全相同。重鏈分子量為50 000~75 000,由450~550個氨基酸殘基組成。重鏈恒定區(qū)的氨基酸組成和排列順序不同,其抗原性也不同。據(jù)此,可將抗體分為5類(class),即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相應(yīng)的重鏈分別為μ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈和ε鏈。不同類的Ig具有不同的特征,如鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵的數(shù)量和位置、結(jié)構(gòu)域的數(shù)量及鉸鏈區(qū)的長度等均不完全相同。
抗體主要功能:中和有害素和阻止病原體入侵。識別并特異性結(jié)合抗原是抗體的主要功能,執(zhí)行該功能的結(jié)構(gòu)是抗體的V區(qū),其中CDR部位在識別和結(jié)合特異性抗原中起決定性作用??贵w有單體、二聚體和五聚體,因此結(jié)合抗原表位的數(shù)目也不相同??贵w結(jié)合抗原表位的個數(shù)稱為抗原結(jié)合價。Ig單體可結(jié)合2個抗原表位,為雙價。SIgA是二聚體,可結(jié)合4個抗原表位,為4價。IgM是五聚體,理論上可以結(jié)合10個抗原,應(yīng)該是10價,但由于立體構(gòu)象的空間位阻,使IgM一般只能結(jié)合5個抗原表位,故為5價。抗體的多樣性來自于基因重排和突變,使其能夠識別各種不同的抗原。
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的,由一種抗原決定簇刺激機體,由一個B淋巴細胞接受該抗原刺激所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體(MonoclonalAntibody)。由多種抗原決定簇刺激機體,相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體,機體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體;除了抗原決定簇的多樣性以外,同樣一種抗原決定簇,也可刺激機體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體??乖碳C體,產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng),由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組球蛋白,這就是免疫球蛋白,這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體??贵w的中和作用是通過阻止病原體與宿主細胞結(jié)合而抑制傳染的擴散。廣州IgD抗體補給公司
特異性抗體可以針對不同的病原體或細胞表面分子,提供精確的免疫保護。廣州IgD抗體補給公司
單克隆抗體(monoclonal antibody,Mab)技術(shù)是20世紀免疫學(xué)技術(shù)的一項里程碑式突破。該技術(shù)將免疫小鼠的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合生成雜交瘤細胞,這種雜交瘤細胞核內(nèi)含有雙親細胞的染色體,繼承了親代細胞的特征。它既具有瘤細胞在體外培養(yǎng)中迅速增殖的能力,又具備免疫脾細胞合成和分泌特異性抗體的特性。隨后用適當方法把雜交瘤細胞分離出來,進行單個細胞培養(yǎng),使之大量繁殖,在培養(yǎng)液中形成單個雜交瘤細胞的克?。ㄒ卜Q細胞系)。由于每個B淋巴細胞只有合成一種抗體的遺傳基因,所以單個雜交腐細胞的克隆也只能產(chǎn)生一種專一性抗體,即單克隆抗體。這種制備產(chǎn)生單克隆抗體的技術(shù)被稱為單克隆抗體技術(shù)。廣州IgD抗體補給公司