抗體水解片段:在一定條件下,Ig分子肽鏈的某些部分易被蛋白酶水解為不同片段。木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶(pepsin)是很常用的兩種Ig蛋白水解酶,并可籍此研究Ig的結構和功能,分離和純化特定的12多肽片段。木瓜蛋白酶水解Ig的部位是在鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的兩條重鏈的近N端,可將Ig裂解為兩個完全相同的Fab段和一個Fc段。Fab段即抗原結合片段(fragment antigenbinding,Fab),由一條完整的輕鏈與重鏈的VH和CHl結構域組成。一個Fab片段為單價,可與抗原結合但不產生凝集反應或沉淀反應;Fc段即可結晶片段(fragment crystallizable,Fc),由Ig的CH2和CH3結構域組成。Fc段無抗原結合活性,是Ig與效應分子或細胞相互作用的部位。多克隆抗體通常由多個不同的B細胞克隆產生,這些細胞分別產生針對不同抗原的抗體。廣東IgM抗體生產廠家
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細胞,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中,未融合的小鼠骨髓瘤細胞中DNA的從頭合成途徑會被阻止;未融合的骨髓瘤細胞又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶(HGPRT),不能利用補救途徑合成DNA;這樣未融合小鼠骨髓瘤細胞的兩個DNA合成途徑都被阻止,骨髓瘤細胞DNA不能復制而死亡。 未融合的B淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶,但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由于從B淋巴細胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶,可以通過補救途徑合成DNA,并具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性,因此,雜交瘤細胞能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。四川兔抗富含脯氨酸蛋白11多克隆抗體試劑單克隆抗體的研究有助于開發(fā)個體化的醫(yī)療方案。
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、只針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養(yǎng)成細胞群,可制備針對一種抗原表位的特異性抗體,即單克隆抗體。單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細胞生產的,雜交瘤細胞是由一個經抗原啟動后的B細胞與一個骨髓瘤細胞融合形成。單克隆抗體優(yōu)點:純度高,靈敏度高,特異性強,交叉反應少,制備的成本低。缺點:對技術有一定的要求,而且通過抗原的化學處理很容易丟失表位。
19世紀后期,Von Behring及其同事Kitasato研究發(fā)現,用白喉或破傷風免疫動物后可產生具有中和有害素作用的物質,稱之為antitoxin,隨后引入“抗體”一詞來泛指抗有害素類物質??贵w(antibody,Ab)是B細胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細胞所產生的糖蛋白,主要存在于血清等體液中,是介導體液免疫的重要效應分子,能與相應抗原特異性結合,發(fā)揮免疫功能。1937年,Tiselius和Kabat用電泳方法將血清蛋白分為白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等組分,并發(fā)現抗體主要存在于γ區(qū),因此抗體又被稱為γ球蛋白。單克隆抗體的研究有助于了解免疫系統的功能。
抗體重鏈和輕鏈:輕鏈分子量約為25 000,由214個氨基酸殘基構成。輕鏈可分為兩種,分別為kappa(κ)鏈和lambda(λ)鏈。據此,可將Ig分為兩型(type),即κ型和λ型。一個Ig分子上兩條輕鏈的型別總是相同的。不同類Ig既存在κ型,也存在λ型。同一個體內可同時存在κ型和λ型的Ig分子,不同種屬生物體內兩型輕鏈的比例不同。正常人血清Ig的κ:λ約為2:1,而在小鼠則為20:1。Ig的κ與λ的比例異常可以反映免疫系統的異常。根據λ鏈恒定區(qū)個別氨基酸的差異,又可將λ鏈分為λ1、λ2、λ3和λ4四個亞型(subtype)。單克隆抗體的研究有助于發(fā)展更有效的藥物調理方案。廣東IgM抗體生產廠家
單克隆抗體可以用于調理心血管疾病。廣東IgM抗體生產廠家
按抗體產生的來源分為正??贵w(天然抗體),如血型ABO型中的抗A和抗B的抗體,和免疫抗體如抗微生物的抗體。按反應抗原的來源分為異種抗體,異嗜性抗體,同種抗體和自身抗體。按抗原反應的凝集狀態(tài)分為完全抗體IgM和不完全抗體IgG等??贵w在醫(yī)療實踐中應用甚為普遍。如用于疾病的預防、診斷和調理方面都有一定的作用。臨床上用丙種球蛋白預防病毒性肝炎、麻疹、風疹等,國際上用抗Rh免疫球蛋白預防因Rh血型不合引起的溶血癥。診斷上如類風濕因子用于類風濕性關節(jié)炎,抗核抗體(ANA)、抗DNA抗體用于系統性紅斑狼瘡,抗精子抗體用于原發(fā)性不孕癥的診斷等;調理上如中毒用抗毒調理以及免疫缺陷性疾病的調理等。廣東IgM抗體生產廠家