什么樣本可以做二代測序？②

組織樣本

新鮮組織：如手術(shù)切除的**組織、活檢組織等。新鮮組織樣本中的細胞完整性較好，能夠提供高質(zhì)量的DNA和RNA。在**研究中，對新鮮**組織進行全基因組測序、轉(zhuǎn)錄組測序等，可以深入了解**的基因突變、基因表達變化等情況。例如，在研究結(jié)直腸*的發(fā)病機制時，對手術(shù)切除的結(jié)直腸*組織及其*旁組織進行測序，比較兩者之間的差異，以發(fā)現(xiàn)**相關(guān)的基因變異和表達調(diào)控異常。

福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織：這是臨床上常用的保存組織樣本的方式。FFPE組織中的DNA和RNA會有一定程度的損傷和降解，但經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶崛『托迯?fù)處理后，仍然可以用于二代測序。在回顧性研究中，大量的FFPE組織存檔樣本可以被利用起來。例如，對多年前保存的乳腺*FFPE組織進行測序，研究乳腺*的疾病進展和***反應(yīng)相關(guān)的基因變化。 二代測序的優(yōu)勢是高準(zhǔn)確性。海南二代測序分析

二代測序——技術(shù)原理類問題

二代測序與一代測序的區(qū)別是什么：一代測序技術(shù)如Sanger測序，一次只能讀取一條DNA序列，通量低、速度慢、成本高，但準(zhǔn)確性高，適用于對少量基因片段的精確測序。而二代測序技術(shù)具有高通量、速度快、成本低等優(yōu)點，可以同時對大量DNA分子進行測序，但在單個堿基的準(zhǔn)確性上稍低于一代測序，二者在不同的應(yīng)用場景中各有優(yōu)勢。二代測序有哪些主要的測序原理：主要包括邊合成邊測序和連接法測序。邊合成邊測序是在DNA聚合酶的作用下，逐個添加帶有熒光標(biāo)記的dNTP，通過檢測釋放的熒光信號來確定堿基序列；連接法測序則是利用DNA連接酶將寡核苷酸探針連接到模板DNA上，根據(jù)連接的探針序列來推斷模板DNA的堿基組成。 遼寧哪里有二代測序應(yīng)用二代測序?qū)嶒炁c測序原理是什么？

二代測序的操作流程有哪些？

1.DNA提取與質(zhì)檢

· 純凈、足量、質(zhì)量好的樣本DNA是檢測成功的基礎(chǔ)（可以來源于血漿、新鮮組織等）

2.DNA處理→文庫構(gòu)建

· 得到統(tǒng)一長度區(qū)間+有接頭的DNA片段

· 步驟：DNA打斷→末端修復(fù)→片段篩選→加A尾→接頭連接→PCR

3.靶向捕獲

· 特定區(qū)域基因的定向檢測

4.上機測序

· 根據(jù)通量情況選擇測序儀

· 上樣后機器完成

5.數(shù)據(jù)分析

· 初級分析：光強數(shù)據(jù)（不同熒光標(biāo)記堿基）→序列信息（AGCT）

· 二級分析 多儀器自帶

· 三級分析 vcf文件 可diy

①二代測序一般多久出結(jié)果？

二代測序（Next-GenerationSequencing，NGS）出結(jié)果的時間會受到多種因素的影響，一般在數(shù)天到數(shù)周不等。

1、樣本類型和質(zhì)量

不同的樣本類型處理時間不同。例如，血液樣本相對容易處理，提取DNA的過程比較常規(guī)。如果是組織樣本，可能需要先進行樣本的解離等復(fù)雜操作。如果樣本質(zhì)量高，DNA提取和文庫構(gòu)建等前期工作會比較順利，能加快整體進程。但如果樣本量少或者DNA有降解等質(zhì)量問題，可能需要重新提取樣本或者進行DNA修復(fù)等操作，這會**延長時間。例如，對于新鮮血液樣本，DNA提取可能在1-2天內(nèi)完成；而對于一些福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織樣本，可能需要3-5天來完成高質(zhì)量DNA的提取和后續(xù)的優(yōu)化處理。

二代測序的使用場景都有哪些？

不同二代測序技術(shù)平臺的速度

Illumina 測序平臺：這是目前市場上應(yīng)用較為***的二代測序平臺之一，其測序速度較快。例如 Illumina NovaSeq 系列，一次運行可以在 1-3 天內(nèi)產(chǎn)生大量的數(shù)據(jù)，通量可達數(shù)億甚至數(shù)十億條讀長，能夠滿足大規(guī)?；蚪M學(xué)研究和臨床檢測的需求。

Roche 454 測序平臺：Roche 454 測序系統(tǒng)的測序速度也較快，其特點是測序片段比較長，高質(zhì)量的讀長能達到 400bp 左右，一次運行可以在 24 小時左右完成對一定數(shù)量樣本的測序。

BGISEQ 系列：華大智造的 BGISEQ 系列測序儀在速度上也有出色表現(xiàn)，如全球二代測序速度**快設(shè)備 E25 量產(chǎn)，為快速測序提供了有力支持 二代測序廣泛應(yīng)用于個性化醫(yī)學(xué)。重慶二代測序流程

宏基因組測序也是二代測序。海南二代測序分析

二代測序技術(shù)在不同人群中的準(zhǔn)確性有何差異③

孕婦及胎兒

優(yōu)勢：無創(chuàng)產(chǎn)前篩查（NIPT）是二代測序技術(shù)用于孕期胎兒常見染色體非整倍體篩查的應(yīng)用，對于唐氏綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征等染色體異常疾病的檢測準(zhǔn)確率分別能達到95%、85%、75%以上，明顯高于傳統(tǒng)血清學(xué)篩查。

局限性：孕婦外周血中胎兒游離DNA來源于胎盤滋養(yǎng)細胞，可能與胎兒實際情況不一致，導(dǎo)致假陽性。母親若合并免疫疾病、凝血功能障礙等，會使外周血中游離DNA含量過高，掩蓋胎兒來源的游離DNA，造成假陰性510. 海南二代測序分析

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